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此酶免試劑盒可用于人血清和血漿中抗腺病毒IgM抗體的定性和定量檢測(cè)。

腺病毒是人和動(dòng)物體內(nèi)普遍存在的一種病原體，可分為許不同的血清型。腺病毒是一種常年存在所有人群中的地方性疾病。 這種傳染病可以通過(guò)空氣傳播，也可通過(guò)塵埃傳播。腺病毒主要感染呼吸道黏膜和腸道黏膜，也會(huì)感染角膜。它們主要集中于上皮細(xì)胞和局部附屬淋巴結(jié)。腺病毒可 引起各種已知的呼吸道病毒性疾病：呼吸道疾病、肺炎、與游泳池相關(guān)的咽結(jié)膜炎高燒和角膜結(jié)膜炎流行病。腺病毒的腸內(nèi)感染主要出現(xiàn)在小于一歲的小孩中。它主 要特點(diǎn)是出現(xiàn)流行性急性腸胃炎，通常是由腺病毒40和41引起的。分離腺病毒或血清學(xué)檢測(cè)可以檢測(cè)是否急性腺病毒感染。腺病毒的血清學(xué)檢測(cè)特別重要，因?yàn)?它可確定病人是否是急性腺病毒感染，另外它也用于大型流行病學(xué)的調(diào)查研究。ELISA主要測(cè)抗六聯(lián)體成分上群特異性決定簇的抗體。建議用于檢測(cè)特異性抗體 的檢測(cè)方法有：血凝抑制和血清中和實(shí)驗(yàn)。由于腺病毒到處都存在以及相關(guān)血清型之間的交叉反應(yīng)，為了確定感染，可使抗體濃度提高4倍或更高的血清轉(zhuǎn)化就很有 必要了。在血清學(xué)檢測(cè)中，IgG是主要被檢測(cè)的抗體。

此固相ELISA試劑盒利用的是夾心法。包被孔中包被了抗原。用對(duì)IgM具有特異性的酶標(biāo)二抗來(lái)檢測(cè)結(jié)合到包被抗原上的樣品特異性抗原。底物反應(yīng)后，所顯示的顏色強(qiáng)度與IgM特異性抗體的濃度成正比。樣品的結(jié)果可直接用標(biāo)準(zhǔn)曲線獲得。

1）       RF吸附劑

2）       移液器，體積：5；50；100；500 µL

3）       校準(zhǔn)儀

4）       樣品稀釋用試管（1ml）

5）       帶試劑儲(chǔ)器8道移液器

6）       洗滌瓶，自動(dòng)或半自動(dòng)洗板機(jī)

7）       能在450nm處讀數(shù)的酶標(biāo)儀

8）       雙蒸水或去離子水

9）       吸水紙，取樣吸頭和計(jì)時(shí)器

6.1成分準(zhǔn)備

6.2樣品稀釋

6.3用RF吸附劑處理：

為了避免吸附特異性抗體，應(yīng)當(dāng)避免溫育時(shí)間＞15min。

預(yù)處理的樣品可能會(huì)是渾濁的。

1）       加100µL標(biāo)準(zhǔn)品、質(zhì)控品或已稀釋樣本于相應(yīng)反應(yīng)孔中，在定性檢測(cè)中只使用標(biāo)準(zhǔn)品B。

2）       封板后室溫（18℃-25℃）溫育60分鐘。

3）       移去粘性金屬板，棄去孔中液體。用300µL洗滌液洗板3次，在吸水紙上拍干。

4）       在每一微孔中加入100µL酶聯(lián)物。

5）       封板后室溫（18℃-25℃）溫育30分鐘。

6）       移去粘性金屬板，棄去孔中液體。用300µL洗滌液洗板3次，在吸水紙上拍干。加底物液和終止液時(shí)，如果有條件的話，可使用8孔微量移液器。確保底物液和終止液都是相同的時(shí)間間隔加入。使用確切容積并避免氣泡產(chǎn)生。

7）       每孔加TMB底物液100µL。

8）       室溫（18℃-25℃）避光溫育20分鐘。

9）       在每一微孔中加入100µLTMB終止液以終止底物反應(yīng)。輕輕搖動(dòng)包被板以使試劑混合均勻。此時(shí)，顏色藍(lán)色變成黃色。

10）    加終止液后60分鐘內(nèi)在450nm處測(cè)OD值。

在半對(duì)數(shù)坐標(biāo)紙上或用自動(dòng)生成的方法，以標(biāo)準(zhǔn)品的OD值為Y軸，濃度為X軸，繪制一標(biāo)準(zhǔn)曲線圖。用立體圖、4參數(shù)對(duì) 數(shù)圖或?qū)?shù)-對(duì)數(shù)圖都可獲得良好的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。對(duì)于標(biāo)準(zhǔn)曲線圖，用標(biāo)準(zhǔn)品的每一單值進(jìn)行計(jì)算（樣品結(jié)果明顯異常的值必須刪除掉，應(yīng)使用更加合理的單值）。樣 品的濃度可直接從標(biāo)準(zhǔn)曲線上獲得。一旦樣品稀釋了，就應(yīng)當(dāng)乘以相應(yīng)的稀釋因子。如果樣品所測(cè)得的濃度高于zui高標(biāo)準(zhǔn)，則應(yīng)根據(jù)實(shí)驗(yàn)前的準(zhǔn)備說(shuō)明所述對(duì)樣品進(jìn) 行稀釋，并重新檢測(cè)。

9、結(jié)果判定： ＞ 12 U/ml  為陽(yáng)性,8 - 12 U/ml  為可疑,＜ 8 U/ml  為陰性

此檢測(cè)結(jié)果并不是任何治療結(jié)果判定的*因素，它應(yīng)當(dāng)結(jié)合臨床觀察和診斷結(jié)果加以判斷。

本譯文僅供參考，詳情請(qǐng)以原文為準(zhǔn)。

 

 

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