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        EHF ELISA Kit使用說(shuō)明書
        EHF  ELISA  Kit使用說(shuō)明書
        (德國(guó)IBL*,貨號(hào):RE57451)
        德國(guó)IBL中國(guó)*代理商“深圳科潤(rùn)達(dá)生物工程有限公司”竭誠(chéng)為您服務(wù)
         
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        此酶免試劑盒可用于流行性出血熱(EHF)病人血清中抗?jié)h坦病毒IgG和IgM的定性檢測(cè)。
        前言簡(jiǎn)介
        流行性出血熱(EHF)又稱腎病綜合征出血熱(HFRS),是由漢坦病毒(Hantaan type)引起的。與流行性腎病相比(因近距離接觸普馬拉病毒而被傳染),HFRS的傳染性更嚴(yán)重,一般都會(huì)伴隨有尿毒癥、呼吸麻痹和伴隨有典型休克綜合癥的出血,甚至死亡。這種疾病起初的癥狀是流行性感冒樣癥狀。HFRS起初的典型癥狀是血小板減少癥和白細(xì)胞增多癥。漢坦病毒主要分布于亞洲和巴爾干各邦地區(qū),通過(guò)直接接觸嚙齒動(dòng)物、嚙齒動(dòng)物的排泄物或分泌物而傳染給人。士兵、農(nóng)民和露營(yíng)者都特別容易受到危險(xiǎn)。EHF ELISA Kit。EHF ELISA Kit。EHF ELISA Kit。
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        實(shí)驗(yàn)原理
        包被孔中包被了重組的漢灘型漢坦病毒核殼體蛋白。在檢測(cè)IgM抗體時(shí),為了避免由IgG抗體或類風(fēng)濕因子引起的非特異性因素的干擾,病人血清必須與類風(fēng)濕因子IgG吸附劑一起孵育。
        實(shí)驗(yàn)過(guò)程孵育期間,抗重組漢坦病毒抗原的特異性抗體會(huì)結(jié)合到固相包被板上。洗板后,我們分別用過(guò)氧化酶標(biāo)記的抗人IgG和IgM抗體檢測(cè)特異性的IgG和IgM。加入底物液后顯色,溶液所顯示的顏色強(qiáng)度與結(jié)合的抗體量成正比。之后用酶標(biāo)儀讀取OD值。EHF ELISA Kit。EHF ELISA Kit。EHF ELISA Kit。
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        貯存及穩(wěn)定性
        試劑盒應(yīng)當(dāng)在2~8℃運(yùn)輸和儲(chǔ)存,避免高溫和陽(yáng)光直射,沒(méi)有打開(kāi)的試劑能保存到有效期。包被條在封閉的袋子內(nèi)2~8℃能保存到有效期。準(zhǔn)備好的試劑的儲(chǔ)存及其穩(wěn)定性在相應(yīng)章節(jié)已闡明。
        開(kāi)封的微孔板密封放置2-8℃下可保存至有效期。EHF ELISA Kit。EHF ELISA Kit。EHF ELISA Kit。
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        樣品采集和貯存EHF ELISA Kit。EHF ELISA Kit。
        人血清EHF ELISA Kit。EHF ELISA Kit。
        注意靜脈穿刺采集全血的常規(guī)注意事項(xiàng)。從采集到血液樣品的那一刻起到檢測(cè)時(shí)都應(yīng)保持血液樣品的化學(xué)整體性。不要使用明顯溶血、黃疸的和脂血樣品。如果樣品出現(xiàn)混濁,則在實(shí)驗(yàn)前應(yīng)當(dāng)離心以除去所有的微粒物質(zhì)。此試驗(yàn)要采用人血清樣本
        儲(chǔ)存
        2-8℃
        ≤-20℃
        避免熱源和太陽(yáng)直射,避免反復(fù)凍溶。
        穩(wěn)定性
        5天
        12mon
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        試劑盒成分EHF ELISA Kit。EHF ELISA Kit。EHF ELISA Kit。
        規(guī)格
        符號(hào)
        成分
        1 x 12 x 8
        MTP
        微孔反應(yīng)板
        即用,可分拆.預(yù)包被有重組漢灘型抗原(strain: CG 76-118)
        1 x 750 µL
        ANTI IgG CONJ CONC
        酶聯(lián)物(20倍濃縮)
        過(guò)氧化酶標(biāo)記抗IgG
        1 x 750 µL
        ANTI IgM CONJ CONC
        酶聯(lián)物(20倍濃縮)
        過(guò)氧化酶標(biāo)記抗IgM
        1 x 1.5 mL
        CONTROL + IgG
        陽(yáng)性質(zhì)控IgG
        即用.內(nèi)含:人血清,穩(wěn)定劑,防腐劑
        1 x 1.5 mL
        REFCONTROL IgG
        參考對(duì)照質(zhì)控IgG
        即用.內(nèi)含:人血清,穩(wěn)定劑,防腐劑
        1 x 1.5 mL
        CONTROL + IgM
        陽(yáng)性質(zhì)控IgM
        即用.內(nèi)含:人血清,穩(wěn)定劑,防腐劑
        1 x 15 mL
        DILBUF CONC
        樣品稀釋緩沖液(20倍濃縮)
        紅色瓶蓋.內(nèi)含:PBS,pH7.4,清潔劑和0.01%的硫柳汞
        1 x 1.5 mL
        REFCONTROL IgM
        參考對(duì)照質(zhì)控IgM
        即用.內(nèi)含:人血清,穩(wěn)定劑,防腐劑
        1 x 1.9 mL
        CONTROL-
        陰性質(zhì)控
        即用.內(nèi)含:人血清,穩(wěn)定劑,防腐劑
        1 x 100 mL
        WASHBUF CONC
        洗滌液(10倍濃縮)
        內(nèi)含:PBS緩沖液
        1 x 1.5 mL
        RE-AB
        類風(fēng)濕因子吸附劑
        即用.內(nèi)含抗-人IgG, 穩(wěn)定劑,防腐劑
        1 x 12 mL
        TMB SUBS
        TMB底物液
        即用.內(nèi)含:TMB
        1 x 12 mL
        TMB STOP
        TMB終止液
        即用.內(nèi)含0.5 M 硫酸
        1 x
        FOIL
        膠粘薄膜
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        實(shí)驗(yàn)做需器材但試劑盒沒(méi)提供EHF ELISA Kit。EHF ELISA Kit。EHF ELISA Kit。
         
        1、微移液管  體積(5; 20; 50; 100; 200; 1000 µL)
        2、渦旋混合器
        3、保溫箱, 37°C
        4、試管(用于樣品稀釋)
        5、8道微量移液器
        6、洗瓶,自動(dòng)或半自動(dòng)洗板機(jī)
        7、酶標(biāo)儀
        8、雙蒸水或去離子水
        9、吸水紙,吸嘴,計(jì)時(shí)器
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        實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備EHF ELISA Kit。EHF ELISA Kit。EHF ELISA Kit。
        實(shí)驗(yàn)前將試劑盒平衡至室溫(18-25°C).含結(jié)晶的緩沖濃縮液可在37°C下迅速將其溶解.實(shí)驗(yàn)前將其冷卻至至室溫(18-25°C)
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        稀釋濃宿成分的準(zhǔn)備(以測(cè)32孔為例)EHF ELISA Kit。EHF ELISA Kit。EHF ELISA Kit。EHF ELISA Kit。
        提示:實(shí)驗(yàn)前取所需量試劑,并迅速用于稀釋.

        濃縮液
        (示例)
        組分
        體積
        稀釋液
        比例
        備注
        存儲(chǔ)
        穩(wěn)定性
        3mL
        DILBUF CONC
        57mL
        去離子水
        1:20
        充分混勻
        2-8°C
        1周
        10 mL
        WASHBUF CONC
        90 mL
        去離子水
        1:10
        充分混勻
        2-8°C
        8周
        200 µL
        ANTI IgG CONJ CONC
        OR
        ANTI IgM CONJ CONC
        3.8 mL
        稀釋洗滌液
        1:20
        充分混勻
        -
        實(shí)驗(yàn)結(jié)束后倒掉

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        樣品稀釋EHF ELISA Kit。EHF ELISA Kit。EHF ELISA Kit。

         
        稀釋
         
        比例
        備注
         
        穩(wěn)定性
        IgG樣品
        常規(guī)
        稀釋樣品稀釋液
        1:201
        10 µL+2000 µL
        2-8°C
        6周
        IgM樣品
        常規(guī)
        稀釋樣品稀釋液
        1:201
        10 µL+2000 µL
        (加15 µL類風(fēng)濕因子吸附劑至250 µL稀釋血清樣品, 18-25°C孵育30分鐘)
        2-8°C
        6周

        提示:未稀釋樣品可于-20°C下保持?jǐn)?shù)月
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        實(shí)驗(yàn)步驟EHF ELISA Kit。EHF ELISA Kit。EHF ELISA Kit。EHF ELISA Kit。
        1.將100μl即用型陽(yáng)性質(zhì)控、陰性質(zhì)控、參考對(duì)照質(zhì)控和稀釋血清樣品(如是IgM樣品,需用類風(fēng)濕因子吸附劑前處理)加入到相應(yīng)的微孔中。
        2.膠粘薄膜蓋板,37℃下溫育45分鐘。
        3.移除膠粘薄膜, 棄除孔內(nèi)反應(yīng)液.每孔加入300μl稀釋洗滌液,重復(fù)洗板4次,在吸水紙上拍干去除殘留液滴。
        4.每孔中加入100μl稀釋酶聯(lián)物(IgG 或IgM)
        5.膠粘薄膜蓋板。37℃下溫育45分鐘.
        6.移除膠粘薄膜, 棄除孔內(nèi)反應(yīng)液.每孔加入300μl稀釋洗滌液,重復(fù)洗板4次,在吸水紙上拍干去除殘留液滴。
        7.加底物液和終止液,建議用8道微移液器,保證加液相等的時(shí)間間隔。避免產(chǎn)生氣泡。
        8.每孔中加入100μl TMB底物液
        9.室溫(18-25°C)溫育10分鐘
        10.每孔中加入100μl終止液終止底物液反應(yīng)。
        11.20分鐘內(nèi)于酶標(biāo)儀450nm處讀取OD值。(參考波長(zhǎng):650nm)
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        結(jié)果計(jì)算EHF ELISA Kit。EHF ELISA Kit。EHF ELISA Kit。
        用病人樣品的OD值比上參考對(duì)照質(zhì)控的OD值計(jì)算檢驗(yàn)結(jié)果
        A病人樣品/ A參考對(duì)照質(zhì)控= Q
         EHF ELISA Kit。EHF ELISA Kit。EHF ELISA Kit。
        IgG抗體:EHF ELISA Kit。EHF ELISA Kit。EHF ELISA Kit。

        Q<1
        陰性:沒(méi)有檢測(cè)到抗?jié)h灘型漢坦病毒IgG抗體
        1≤Q≤1.5
        可疑灰色區(qū)域,不能明確說(shuō)明結(jié)果,10天之后應(yīng)當(dāng)對(duì)疾病的病程進(jìn)行再次檢測(cè)。如果疑似病人感染了漢坦病毒,我們建議您對(duì)檢測(cè)的樣品也檢測(cè)下漢灘病毒(Hantaan)IgM抗體或檢測(cè)下普馬拉(Puumala)病毒抗體。
        Q>1.5
        陽(yáng)性:檢測(cè)到抗?jié)h灘病毒特異性IgG抗體

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        IgM抗體:EHF ELISA Kit。EHF ELISA Kit。EHF ELISA Kit。

        Q<1
        陰性:沒(méi)有檢測(cè)到抗?jié)h灘型漢坦病毒IgM抗體
        1≤Q≤2
        可疑灰色區(qū)域,不能明確說(shuō)明結(jié)果,10天之后應(yīng)當(dāng)對(duì)疾病的病程進(jìn)行再次檢測(cè)。如果疑似病人感染了漢灘病毒,我們建議您對(duì)檢測(cè)的樣品也檢測(cè)下普馬拉病毒(Puumala)抗體。
        Q>2
        陽(yáng)性:檢測(cè)到抗?jié)h坦病毒特異性IgM抗體


        本譯文僅供參考,詳情請(qǐng)以原文為準(zhǔn)。
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