人半乳糖缺乏IgA1（Gd-IgAⅠ）試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）。往預先包被人半乳糖缺乏IgA1（Gd-IgA1）捕獲抗體的包被微孔中，依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體，經(jīng)過溫育并*洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的人半乳糖缺乏IgA1（Gd-IgA1）呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），計算樣品濃度。

 

　　人半乳糖缺乏IgA1（Gd-IgAⅠ）試劑盒操作步驟：

 

　　1、從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。

 

　　2、設(shè)置標準品孔和樣本孔，標準品孔各加不同濃度的標準品50μL；

 

　　3、樣本孔中加入待測樣本50μL；空白孔不加。

 

　　4、除空白孔外，標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標記的檢測抗體100μL，用封板膜封住反應孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。

 

　　5、棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液（350μL），靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復洗板5次（也可用洗板機洗板）。

 

　　6、每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

 

　　7、每孔加入終止液50μL，15min內(nèi)，在450nm波長處測定各孔的OD值。

 

　　實驗結(jié)果計算：

 

　　以所測標準品的OD值為橫坐標，標準品的濃度值為縱坐標，在坐標紙上或用相關(guān)軟件繪制標準曲線，并得到直線回歸方程，將樣品的OD值代入方程，計算出樣品的濃度。

 

　　人半乳糖缺乏IgA1（Gd-IgAⅠ）試劑盒性能：

 

　　1、檢測范圍：62.5U/mL–2000U/mL。

 

　　2、靈敏度：檢測濃度小于10U/mL。

 

　　3、特異性：不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應。

 

　　4、重復性：板內(nèi)變異系數(shù)小于10%，板間變異系數(shù)小于15%。