多巴胺試劑盒（生物胺類）

（德國IBL：貨號：RE59161）

通用名稱：多巴胺ELISA試劑盒

英文名稱：dopamineELISA

產品規格：96T

多巴胺試劑盒（生物胺類）預期用途：

可用于人血漿和尿液中多巴胺的體外定量檢測，可手動操作，也可自動操作。進一步的研究表明：此試劑盒還可用于組織勻漿和細胞培養上清液的研究。

前言簡介：

兒茶酚胺類激素腎上xian素、去甲腎上xian素和多巴胺主要由腎上腺髓質、交感神經系統和大腦產生。它們幾乎影響所有的組織，并與其它激素和神經系統一起參與各種生理過程的調節。在許多疾病中，兒茶酚胺激素及其代謝產物間甲腎上xian素和去甲變腎上xian素的分泌量都會增加，因而這些激素可用于疾病的診斷。所以，這些激素的檢測對于疾病的診斷及神經系統腫瘤疾病的具有重要意義。它主要用于嗜鉻細胞瘤的診斷，當然也用于成神經細胞瘤和神經節細胞瘤的診斷。因為在實驗一開始時有提取步驟，所以用戶可使用所有動物材料進行實驗。此試劑盒可檢測大鼠、小鼠或其它動物，所有動物的兒茶酚胺的化學結構相同。

檢測原理：

利用的是ELISA的夾心法。微孔中包被了羊抗兔抗體。在溫育時間之內，加入的抗體可直接與抗原分子上的一個表位結合。樣品中的抗原與酶標二抗（可與抗原分子上的不同表位結合）在包被孔中溫育。加入底物液后，溶液所顯示的顏色強度與樣品中抗原的量成正比。樣品的結果可直接用標準曲線確定。

貯存與穩定性：

運輸環境和儲存環境溫度為2-8℃，避免熱源或太陽直射。樣品的儲存與穩定性及試劑的準備將在相關章節中闡述。開封的試劑盒在有效期內穩定，前提是要將試劑盒用袋子密封并儲存于2-8℃的環境下。

實驗所需器材（但試劑盒不提供）：

1、移液器（10；10-100；100-1000μL）

2、軌道搖床（200-900rpm）

3、旋渦混合器

4、帶儲器的8通道移液器

5、洗滌瓶，自動或半自動包被板清洗系統

6、酶標儀，405nm(參考波長：620-650nm)

7、雙蒸水或去離子水

8、吸水紙，取樣吸頭，計時器

9、樣品稀釋用試管

檢測步驟：

1、在一次性試管內，用釋放緩沖液以1:51的比例稀釋提取的標準品，質控品和尿液樣本（如：10ul提取樣本+500ul的釋放緩沖液）

2、在包被板的每一微孔中加入75μL剛配置好的COMT酶溶液，輕輕振蕩。

3、將預稀釋的標準品，質控品和尿液樣本加100ul至相應孔內血漿樣本直接加100ul于相應孔內在此步驟中，將槍頭直接觸碰COMT酶溶液，顏色會轉為粉紅色，輕輕混勻。

4、每孔中加入50μL多巴胺抗血清。

5、蓋板。在振蕩器（400-600rpm）上18-25℃的環境下溫育120min

6、棄去孔內反應液，每孔用250-300μL已稀釋好的洗滌液洗板6次。

7、每孔加入100μL酶聯物

8、蓋板。在軌道搖床（400-600rpm）上18-25℃的環境下溫育60min

9、棄去孔內反應液，用250-300μL已稀釋好的洗滌液洗板6次。

10、加底物液和終止液時，其時間間隔應相同

11、每孔加入200μL底物液

12、在軌道搖床（400-600rpm）上18-25℃的環境下溫育40min。如果自動操作時的溫度超過25℃時，則應相應的將溫育時間縮短至30min。

13、每孔加入50μLPNPP終止液以終止底物反應，輕輕振蕩包被板以充分混合試劑成分。

14、加終止液后60min之內405nm處讀取OD值。（參考波長：620-650nm）

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