登革熱檢測(cè)試劑操作說(shuō)明書

目前市場(chǎng)上同一產(chǎn)品不同品牌的數(shù)量眾多，怎么識(shí)別好的產(chǎn)品和不好的產(chǎn)品呢？以及操作步驟的重要性，即使是一個(gè)好的產(chǎn)品，樣本處理不好也可能導(dǎo)致不好的結(jié)果，所以產(chǎn)品質(zhì)量、操作細(xì)節(jié)和樣本處理也決定了實(shí)驗(yàn)的成果。

科潤(rùn)達(dá)生物提供的是進(jìn)口的登革熱試劑，以及包裝配送了完整的登革熱檢測(cè)試劑操作說(shuō)明書，并且提供體貼的售后服務(wù)，上班期間有專業(yè)的指導(dǎo)技術(shù)人員解答問(wèn)題，產(chǎn)品質(zhì)量?jī)?yōu)質(zhì)保障，歡迎咨詢訂購(gòu)。

下面介紹的是有關(guān)于德國(guó)IBL品牌采用ELISA方法檢測(cè)人血清和血漿中IgG抗體的登革熱試劑，如有需要了解其他方法或者類型的登革熱試劑，可以搜索科潤(rùn)達(dá)生物網(wǎng)站或者在平臺(tái)留言聯(lián)系我們獲取資料。

登革熱IgG檢測(cè)試劑操作說(shuō)明書

登革熱IgG檢測(cè)試劑盒預(yù)期用途
登革熱IgG檢測(cè)試劑盒可用于人血清、血漿中抗登革熱病毒IgG抗體的定性檢測(cè)。

登革熱IgG檢測(cè)試劑盒檢測(cè)原理

抗登革熱病毒IgG抗體的定性酶免檢測(cè)利用的ELISA技術(shù)。微孔板上預(yù)先包被了結(jié)合樣品相關(guān)抗體的登革熱病毒2型抗原。洗板除去未結(jié)合的樣品物質(zhì)后，加入辣根過(guò)氧酶標(biāo)記的抗人IgG酶聯(lián)物。這一酶聯(lián)物可與捕獲到的登革熱病毒特異性抗體結(jié)合。

加入能產(chǎn)生藍(lán)色反應(yīng)產(chǎn)物的TMB底物液后，如果顯示藍(lán)色則可知已形成免疫復(fù)合物。所顯示顏色的強(qiáng)度與樣品中登革熱病毒特異性IgG抗體的量成正比。加入硫酸以終止反應(yīng),以便產(chǎn)生黃色的終點(diǎn)顏色。用一酶標(biāo)儀在450m處讀取OD值。

登革熱IgG檢測(cè)試劑盒組成成分
1、微孔板：12×8可拆板條，包被有登革熱2型抗原，真空密封于鋁鉑金屬袋中。
2、樣品稀釋液：1瓶，內(nèi)含100ml樣品稀釋用緩沖液，pH2±0.2，液體為黃色，待用，白蓋。
3、終止液：1瓶，內(nèi)含15ml硫酸，0.2mol/l；待用，紅蓋
4、洗滌液（20×濃縮）：1瓶，50ml，含20倍濃縮的樣品洗滌液，pH7.2±0.2，白蓋
5、酶聯(lián)物：1瓶，含20ml HRP標(biāo)記的兔抗人IgG，藍(lán)色，待用，黑蓋。
6、底物液：1瓶，含15ml TMB，待用，黃蓋。
7、登革熱 IgG陽(yáng)性質(zhì)控：1瓶，2ml；黃色，待用，紅蓋
8、登革熱 IgG臨界質(zhì)控：1瓶，3ml；黃色，待用，綠蓋
9、登革熱 IgG陰性質(zhì)控：1瓶，2ml；黃色，待用，藍(lán)蓋

實(shí)驗(yàn)所需材料（未提供）
1）可在450/620nm處讀數(shù)的酶標(biāo)儀
2）37℃恒溫箱
3）自動(dòng)或半自動(dòng)洗板機(jī)
4）取樣吸頭（10µl和100µl）
5）旋渦混合器
6）去離子水或雙蒸水
7）試管
8）計(jì)時(shí)器

登革熱IgG檢測(cè)樣本要求
■樣本采集后（保存在2-8℃）應(yīng)該在5小時(shí)內(nèi)用于檢測(cè)，否則應(yīng)該保存在-20~-70℃。避免反復(fù)凍融，不推薦使用滅活的樣本。
■樣品稀釋：樣品使用樣品稀釋液以1:101的比例進(jìn)行稀釋。

登革熱IgG檢測(cè)方法
實(shí)驗(yàn)開始之前仔細(xì)閱讀操作步驟，嚴(yán)格遵守操作步驟才可以獲得可靠的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。如果這實(shí)驗(yàn)是在ELISA自動(dòng)系統(tǒng)上進(jìn)行，為了避免洗板的影響，我建議在洗板步驟時(shí)，洗板3次改成洗板5次，洗滌液從300µl增加到350µl。實(shí)驗(yàn)開始之前，應(yīng)當(dāng)在試劑盒提供的結(jié)果單上標(biāo)記好所有的樣品和質(zhì)控品。取適當(dāng)數(shù)量的板條置于板架上。

請(qǐng)至少做以下幾個(gè)孔：
1孔（例A1）做空白對(duì)照孔
1孔（例B1）做陰性質(zhì)控
2孔（例C1+ D1）做臨界質(zhì)控
1孔（例E1）做陽(yáng)性質(zhì)控

我們建議您將質(zhì)控和病人樣品做雙份檢測(cè)。照說(shuō)明書給出的實(shí)驗(yàn)步驟進(jìn)行操作，并避免不同步驟之間的時(shí)間隔無(wú)明顯差別。加每一質(zhì)控品和樣品時(shí)都應(yīng)當(dāng)用新的取樣吸頭。把恒溫箱調(diào)至37 ± 1℃。

1）控品和已稀釋好的樣品分別100µl加入到相應(yīng)的微孔中，留下A1做空白對(duì)照孔。
2）蓋板。
3）37±1℃下溫育1h±5min

4）溫育后，移去粘性金屬板，棄取孔內(nèi)反應(yīng)液，用300µl洗滌液洗板3次。避免反應(yīng)孔中的液體濺出。每次洗板間的浸潤(rùn)時(shí)間都應(yīng)大于5秒。后在吸水紙上拍干。

注意：洗板步驟很重要，洗板不充分將可能導(dǎo)致結(jié)果不精確或錯(cuò)誤的OD值。
5）除空白孔外，在每一微孔中都加入100µl登革熱抗IgG酶標(biāo)物，蓋板。
6）室溫下溫育30，避免太陽(yáng)直射
7）重復(fù)步驟4
8）在每一微孔中加入100µlTMB底物液
9）室溫下（20-25℃）避光溫育15min
10）按加TMB底物液的順序和速度在每一微孔中加入100µl終止液。溫育之后，包被板內(nèi)試劑的顏色由藍(lán)色變?yōu)辄S色。

注意：高陽(yáng)性的病人樣品會(huì)引起染色劑沉淀。這些沉淀物會(huì)影響OD值的讀取。例如：我們建議按1：1的比例用生理鹽水預(yù)先稀釋樣品。然后按1：100的比例用稀釋液稀釋樣品，并將結(jié)果乘以2。

11）加終止液后30min之內(nèi)在450/620nm處讀取OD值。


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