胰島素（大鼠超敏）ELISA檢測試劑盒

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【樣品要求】

胰島素elisa檢測試劑盒(大鼠)可使用血清也可使用血漿作為樣品。

不能使用明顯溶血﹑黃疸和脂血的樣品。

血清：靜脈穿刺采集全血，待其凝血，在室溫下離心分離血清。

血漿：將全血采集到含有抗凝劑的離心管，采集后立即離心分離。

樣品的儲存

樣品蓋好蓋子后，可在實驗前2-8℃下儲存5天，要更長時間儲存，應在-20℃下凍存。在開始實驗前應避免反復凍融樣品。

樣品的稀釋

在第一次實驗中，要是樣品的濃度高于最高標準品，則樣品應用按實驗步驟所描述的10倍或100倍稀釋。在計算濃度時需乘以此稀釋度。

例子：

a） 按1：10稀釋： 10μL的血清+90μL的零標準品（充分搖勻）。

b） 按1：100釋稀：10μL按a）稀釋的血清+90μL的零標準品（充分搖勻）

檢測步驟

所有的標準品、質控品和樣品都必須做雙份檢測以確保所有微孔的檢測條件都一樣。

1）將所需數目的板條置于板架上。。

2）用一次性吸嘴將標準品﹑質控品和樣品分別25μL加入相應的檢測孔中。

3）每孔加入25μL的酶聯物。

4）充分混合10秒，在此步驟中充分混合非常重要。

5）室溫下溫育30分鐘。

6）快速棄去檢測孔中的內含物，每孔加入400μL的洗滌液洗板三次，在吸水紙上拍干以除去殘余液體。注意：洗板步驟是否正確操作會明顯影響實驗的靈敏度和精確度。

7）每孔加入50μL的酶復合物。

8）在室溫下溫育30分鐘。

9）快速棄去檢測孔中的內含物，每孔加入400μL的洗滌液洗板三次，在吸水紙上拍干以除去殘余液體。

10）每孔加入50μL的底物液。

11）在室溫下溫育15分鐘。

12）每孔加入50μL的終止液終止反應。

13）在加終止液后10分鐘內于450±10nm處讀取OD值。

【結果計算】

1) 計算標準品﹑質控品和病人樣品的平均吸光度。

2) 以吸光率為Y軸，濃度為X軸，按照從標準品中獲得的平均吸光率和其相對應的濃度值，繪制一條標準曲線。

3) 利用樣品的平均吸光率，在標準曲線上得出其相應的濃度值，

4) 自動方法：使用計算機三次方模式﹑四參數模式或雙對數函數的計算機程序可得到結果。

5) 樣品的濃度可從標準曲線上直接獲取。樣品的濃度高于最高標準品的濃度則需進一步稀釋。在計算濃度的時候，要乘以樣品的稀釋倍數。

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